הוועידה התכנסה בתל אביב בימים ב'-ו' באייר תש"ב, 19-23 באפריל 1942. השתתפו בוועידה 424 צירים אשר נבחרו על ידי 88,198 חברים. מספר בעלי זכות הבחירה - 118,500. הרכב צירי הוועידה: מפא"י - 300, 'פועלי ציון שמאל' - 19, 'השומר הצעיר' ו'הליגה הסוציאליסטית' - 83, 'פועלי ציון' והחוגים המרקסיסטיים - 7, 'העובד הציוני' - 15.

הוועידה התכנסה בעיצומה של מלחמת העולם השניה והוקדשה כולה לנושא ההתגייסות למלחמה בנאצים וההיערכות לנוכח סכנת כיבוש ארץ ישראל בידי הגרמנים.

הנושאים שהיו על סדר היום בוועידה: המצב המדיני, ההתגייסות לצבא הבריטי, 'כופר הישוב', הוועד למען החייל.

החלטות המרכזיות שהתקבלו בוועידה:

א) קריאה לחברי וחברות ההסתדרות ולבני הנוער להתגייס ליחידות העבריות בצבא הבריטי ולכוחות המגן הישוביים.
ב) קריאה לברית המועצות לשחרר את הפעילים הציונים הכלואים בברית המועצות.
ג) משלוח ברכה לעמי ברית המועצות על עמידתם האיתנה בפני הפולש הנאצי.
ד) הכרזה על משטר צנע של תקופת חרום, במסגרתו נקבע יום עבודה של עשר שעות, כאשר שכר שעה ביום יתרם למאמץ המלחמתי.
ה) גינוי חריף למדיניות 'הספר הלבן' של הממשלה הבריטית.